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          密度梯度離心法、速率區帶離心法和等密度區帶離心法怎么理解

          發布時間:2022-11-28 閱讀452

          密度梯度離心法、速率區帶離心法和等密度區帶離心法怎么理解?

          密度梯度離心法可分為速率區帶離心法和等密度區帶離心法。

          一、密度梯度離心法(又稱區帶離心法)

          原理:不同顆粒之間存在沉降系數差時,在一定離心力作用下,在一定惰性梯度介質中,顆粒各自以一定速度沉降,在密度梯度不同區域上形成區帶的方法。


          密度梯度離心法的優點是:具有很好的分辨率,分離效果好,可一次獲得較純顆粒;

          適用范圍廣,既能分離沉淀系數差的顆粒,又能分離有一定浮力密度的顆粒;

          顆粒不會積壓變形,能保持顆?;钚?,并防止已形成的區帶由于對流而引起混合。

          密度梯度離心法的缺點:

          離心時間較長;

          需要制備梯度液;

          操作嚴格,不宜掌握。


          二、速率區帶離心法

          原理:分離的粒子在離心力作用下,在梯度液中沉降速度的不同,離心后具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內形成幾條分開的樣品區帶,達到彼此分離的目的。

          臨床上單核細胞分離常使用這個方法。使用的分離液是Ficoll、Percoll及蔗糖。把靜脈血中單個核細胞分離出來,前一種分離液將血液中單個核細胞(淋巴細胞和單核細胞)分為一個層,同時提出。而Percoll分離液將血中淋巴細胞和單核細胞分為二個梯度層,分別提取。后者分離效果優于前者,但操作繁瑣。

          密度梯度離心法.jpg

          三、等密度區帶離心法

          原理:不同顆粒存在浮力密度差,在離心力場下,顆?;蛳蛳鲁两?,或向上浮起,一直沿梯度移動到它們密度恰好相等的位置上(即等密度點)形成區帶。

          等密度區帶離心的有效分離取決于顆粒的浮力密度差,密度差越大,分離效果越好,與顆粒的大小和形狀無關,但后兩者決定著達到平衡的速率、時間和區帶的寬度。

          密度梯度離心法-2.jpg

                         





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